Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 7:16 min. • July 8th, 2025
Os oócitos na prófase-I da meiose são transcricionalmente ativos; eles produzem mRNAs e os armazenam em uma forma dormente. Durante a maturação, à medida que o oócito entra em metáfase, os mRNAs armazenados são traduzidos em proteínas.
Para estudar a tradução do mRNA, comece com oócitos de camundongo presos à prófase I suspensos em uma gota de meio. Posicione a pipeta de retenção perto de um único oócito para mantê-la na posição.
Pegue uma pipeta de microinjeção contendo uma mistura repórter. Esta mistura contém dois tipos distintos de mRNA, um que codifica a proteína fluorescente amarela, ou YFP - um repórter fundido com a região 3'-não traduzida do gene alvo - e um mRNA poliadenilado que codifica a proteína fluorescente vermelha.
Injete a mistura repórter no oócito. Incube os oócitos microinjetados em um meio de maturação suplementado com cilostamida - um inibidor químico que mantém a parada da prófase I.
O oócito traduz o mRNA poliadenilado até que a intensidade da fluorescência vermelha atinja um platô, enquanto os níveis de mRNA codificador de YFP sem uma cauda de poliadenilação permanecem como tal.
Transfira os oócitos tratados para um meio de maturação sem cilostamida, o que
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