Ensaio alamarBlue: um método fluorométrico sensível para rastrear os efeitos citotóxicos de formulações de lágrimas artificiais na atividade metabólica de células epiteliais da córnea humana

O filme lacrimal - o fluido protetor que cobre o olho - ajuda a lubrificar e manter as células epiteliais da córnea ocular, CECs, em um estado saudável e metabolicamente ativo. Um filme lacrimal comprometido, como na doença do olho seco, pode causar evaporação lacrimal dos CECs, aumentando sua suscetibilidade a infecções e danos inflamatórios.

As formulações de lágrimas artificiais estabilizam o filme lacrimal e melhoram a retenção de água, evitando a desidratação celular.

Para rastrear os efeitos citotóxicos de uma formulação de lágrima artificial de teste em CECs usando o ensaio alamarBlue, comece com uma cultura aderente de CECs de origem humana em meios adequados. Descarte a mídia.

Incubar a cultura de células com uma concentração específica da formulação de lágrimas artificiais. A formulação lacrimal forma um revestimento sobre as células. Dependendo do efeito cumulativo dos ingredientes constituintes, as células podem sofrer uma perda na atividade metabólica.

Em seguida, adicione a solução alamarBlue contendo resazurina, um corante de cor azul, fracamente fluorescente, não tóxico e solúvel em água.

A resazurina se difunde nas células e é irreversivelmente reduzida em células