Ensaio de vazamento de fluorescência para estudar a interação do peptídeo que penetra nas células com a membrana

Peptídeos que penetram nas células, CPPs, peptídeos curtos e carregados positivamente, podem interagir e atravessar as membranas celulares, facilitando a entrega de cargas impermeáveis às células.

Para estudar o potencial de permeabilização da membrana de um teste de CPP in vitro usando uma imitação de membrana celular, comece com uma grande vesícula unilamelar, LUV, suspensão.

Os LUVs compreendem uma bicamada fosfolipídica carregada com uma sonda fluorescente impermeável à membrana e o par de atenuadores correspondente. Dentro das vesículas, o supressor interage com a sonda fluorescente devido à sua proximidade, causando extinção de fluorescência.

Pipetar a suspensão LUV para uma cubeta de fluorescência de quartzo e diluir com tampão. Adicione uma barra magnética. Transferir para um espectrofluorómetro com agitação magnética para evitar a sedimentação do LUV durante a corrida. Determine a fluorescência de fundo para eliminar quaisquer vazamentos de LUV.

Adicionar a concentração desejada de CPP à suspensão LUV a intervalos regulares.

Com base na hidrofobicidade e carga dos resíduos de aminoácidos dos CPPs, eles perturbam a membrana lipídica LUV, levando à penetração e permeabilizaç