Ensaio de proteína solúvel para quantificar o teor de proteína solúvel em tecidos vegetais

Para quantificar o teor de proteína solúvel em um tecido vegetal, em um tubo, comece com uma quantidade apropriada de tecido vegetal liofilizado moído.

Adicione hidróxido de sódio, um álcali, ao tubo e sonicate. O ambiente alcalino com as forças mecânicas perturba as células, liberando conteúdo intracelular, incluindo macromoléculas - proteínas solúveis e carboidratos. Incubar em temperaturas mais altas.

Na presença de calor, os álcalis causam hidrólise de proteínas, formando peptídeos menores e aumentando a solubilidade das proteínas. Além disso, os carboidratos são degradados.

Centrifugue a mistura. Colete o sobrenadante contendo proteínas solubilizadas. Adicione ácido clorídrico para neutralizar o pH.

Trate a amostra com ácido tricloroacético, TCA. O TCA interrompe a camada de hidratação ao redor das proteínas, levando à agregação de proteínas e precipitação.

Centrifugue e remova o sobrenadante contendo TCA. Lave o pellet de proteína com acetona gelada para remover qualquer TCA residual, que pode interferir na estimativa de proteína solúvel.

Seque a acetona ao ar. Ressuspenda o pellet de proteína em hidróxido de sódio. Diluir com água deionizada. Transfira para os poços de uma p