Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:34 min. • July 8th, 2025
O Toxoplasma gondii - um protozoário unicelular - é um parasita anaeróbio obrigatório, reproduzindo-se apenas dentro das células hospedeiras.
Para quantificar o crescimento intracelular do parasita usando um ensaio baseado em luciferase, pegue uma suspensão de células do parasita que expressam luciferase - uma enzima que produz luminescência após a reação com seu substrato. Adicione a suspensão a uma cultura de fibroblastos do prepúcio humano e incube por um período adequado.
O parasita se liga aos receptores da célula hospedeira e é internalizado por meio de um processo endocítico, formando um vacúolo parasitóforo. A estrutura fornece um nicho para o parasita se reproduzir.
Pós-infecção, aspirar o meio, removendo os parasitas não internalizados. Adicione um tampão de lise contendo um detergente e luciferina - um substrato para luciferase. O detergente no tampão cria poros na membrana celular e lisa completamente as células, resultando na liberação de luciferase.
A enzima liberada oxida as moléculas de luciferina, emitindo luz. Meça a intensidade da luminescência para determinar a atividade da luciferase. Usando poços replicados contendo células hospedeiras infectadas, meça a ativi
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos