Ensaio de luciferase para estudar a eficácia de produtos químicos antiparasitários contra parasitas

O Toxoplasma gondii - um parasita protozoário - se reproduz exclusivamente dentro de células hospedeiras animais nucleadas. Ele invade as células hospedeiras através do processo endocítico, formando um vacúolo parasitóforo. Dentro do vacúolo, o parasita ingere proteínas citosólicas do hospedeiro, adquirindo nutrientes para o crescimento.

Para avaliar a eficácia dos produtos químicos antiparasitários nos parasitas dentro das células hospedeiras, pegue uma placa de ensaio contendo uma cultura aderente de fibroblastos do prepúcio humano em vários poços.

Dispense quantidades iguais de parasitas Toxoplasma que expressam luciferase - uma enzima produtora de luminescência - em cada poço. Incubar, permitindo que os parasitas invadam as células hospedeiras e cresçam dentro do vacúolo parasitóforo.

Pós-incubação, aspirar o meio, removendo os parasitas não ingeridos. Suplementar os poços com diferentes concentrações de composto antiparasitário direcionado à cisteína protease e incubar.

As moléculas de drogas entram na célula hospedeira para alcançar os parasitas. Uma vez dentro, a droga inibe a enzima cisteína protease do parasita, interrompendo a aquisição de nutrientes do parasita ligado ao