Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:40 min. • April 30th, 2023
O Trypanosoma cruzi, um parasita intracelular obrigatório, invade as células hospedeiras de mamíferos como tripomastigota - estágio de desenvolvimento flagelado e não proliferativo - e se diferencia em amastigotas não flageladas, que proliferam no citoplasma por fissão binária.
Após a proliferação, as amastigotas se diferenciam novamente em tripomastigotas que interrompem a entrada das células hospedeiras na circulação, resultando em infecção sistêmica.
Para avaliar o potencial citotóxico in vitro de um medicamento antiparasitário de teste contra o Trypanosoma cruzi, comece com uma cultura de parasitas transgênicos do Trypanosoma cruzi - no estágio de desenvolvimento desejado - expressando de forma estável a enzima β-galactosidase.
Suspenda os parasitas em meios adequados. Transfira para uma placa de vários poços. Adicione concentrações apropriadas do medicamento antiparasitário de teste. Incubar.
A droga se difunde passivamente através das membranas do parasita e é metabolizada em intermediários tóxicos. Esses metabólitos entram nos núcleos e causam danos ao DNA, inibindo a síntese de proteínas, incluindo a β-galactosidase, impactando negativamente a viabilidade do parasita.
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