Ensaio de morte neuronal para avaliar a morte celular em modelo de epilepsia ex vivo

A epilepsia - convulsões espontâneas e recorrentes no cérebro - leva à morte celular neuronal.

Para estudar a morte neuronal em um modelo de epilepsia ex vivo, comece pegando uma fatia organotípica do córtex rinal-hipocampo - preparada a partir de um cérebro de filhote de rato - em um meio apropriado.

A fatia organotípica consiste no córtex rinal e no hipocampo. Sob privação sérica gradual, essas regiões retratam eventos epilépticos em evolução, levando à morte neuronal induzida por convulsões.

Adicione a quantidade necessária de iodeto de propídio, PI - um corante fluorescente - à cultura e incuba. Através da membrana celular danificada, o PI entra nos neurônios mortos e se liga ao DNA; os neurônios vivos, com membrana intacta, não são capazes de captar PI.

Coloque a fatia organotípica em uma lâmina de microscópio para imunocoloração. Adicione a solução de bloqueio de permeabilização e incuba.

As moléculas de detergente na solução solubilizam os lipídios da membrana, criando poros na membrana das células intactas - tornando-as permeáveis para as etapas subsequentes de imunocoloração. As proteínas na solução de bloqueio ligam-se passivamente a locais não específicos das células, re