Ensaio de agregação PolyQ para identificar o efeito neuroprotetor de um composto em vermes

Em alguns distúrbios neurodegenerativos, a proteína associada à doença compreende um trato expandido de poliglutamina, polyQ, - cadeia de resíduos consecutivos de glutamina - e é aberrantemente conformada. A conformação prejudicada desestabiliza a homeostase proteica, causando acúmulo de proteínas e formação de agregados tóxicos, levando à disfunção neuronal e morte.

Para rastrear a capacidade protetora de um composto de teste em aliviar a proteotoxicidade associada à agregação polyQ, obtenha uma suspensão de larvas transgênicas de Caenorhabditis elegans expressando proteínas poliQ marcadas com fluorescência em células musculares da parede corporal.

Pegue uma placa de vários poços contendo meios suplementados com alimentos bacterianos. Adicione o composto de teste em um conjunto de poços. Transfira as larvas para a placa de vários poços. Sele a placa para evitar a desidratação do meio e a contaminação microbiana. Incubar, permitindo que as larvas se transformem em adultos.

Durante o desenvolvimento, à medida que o nematóide envelhece, as proteínas polyQ se acumulam progressivamente dentro das células musculares e formam agregados.

Se o composto de teste estiver presente no meio, el