Ensaio de ferida para avaliar a capacidade migratória de mioblastos murinos em co-cultura

Em resposta a uma ferida, as células secretoras produzem moléculas de sinalização parácrinas para ativar mioblastos - células musculares indiferenciadas. Os mioblastos ativados migram em direção ao local da ferida, onde proliferam, fazendo com que a ferida cicatrize.

Para avaliar a capacidade migratória dos mioblastos in vitro, pegue uma placa multipoços contendo uma monocamada confluente de mioblastos murinos. Usando uma ponta de pipeta, raspe a monocamada para criar um adesivo linear e sem células dentro do poço, que simula o local da ferida.

Complemente cuidadosamente o poço com o meio de crescimento sem perturbar o adesivo da ferida.

Pegue uma inserção membranosa contendo uma cultura aderente de células da crista neural, ou NCCs - células secretoras - em um meio adequado. Coloque a inserção dentro do poço, de modo que os NCCs na base fiquem próximos ao remendo da ferida. Incube a co-cultura pela duração desejada.

Durante a incubação, os NCCs liberam moléculas de sinalização que se ligam aos receptores específicos nos mioblastos, iniciando uma cascata de sinalização. Essa sinalização facilita a reorganização da actina nos mioblastos e, como resultado, essas células desenvolvem p