Ensaio cometa para detecção de danos ao DNA em células

A exposição a agentes nocivos induz quebras de fita simples e dupla no DNA celular, o que leva a danos ao DNA.

Para detectar danos ao DNA, comece com uma suspensão unicelular de células tratadas com produtos químicos em agarose liquefeita de baixo ponto de fusão. Carregue a suspensão em uma lâmina de vidro e deixe a agarose solidificar - permitindo a imobilização das células dentro da matriz de gel poroso.

Trate as células com tampão de lise. Os detergentes no tampão solubilizam as membranas celular e nuclear, enquanto os sais removem as histonas do DNA, formando um corpo nucleóide contendo DNA ligado à matriz nuclear.

Incubar as lâminas em um tampão de eletroforese alcalina. Isso faz com que o DNA se desenrole e gere fragmentos de fita simples. Coloque a lâmina em um aparelho de eletroforese e conecte-a à fonte de alimentação. Isso permite a migração de DNA carregado negativamente em direção ao ânodo positivo.

O DNA não danificado permanece restrito dentro do corpo nucleóide. Em contraste, os fragmentos de DNA menores e danificados começam a se mover em direção ao ânodo. Esse movimento diferencial forma uma estrutura semelhante a um cometa, na qual o DNA não danificado forma a cab