Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 4:04 min. • July 8th, 2025
Os transportadores de aminoácidos são proteínas ligadas à membrana que medeiam a transferência de aminoácidos através das membranas celulares, regulando os processos celulares vitais.
Para estudar a absorção de aminoácidos in vitro, faça uma cultura de células estromais derivadas da medula óssea de camundongos. Aspire o meio de crescimento. Adicione um tampão pré-aquecido suplementado com glutamina - um aminoácido - marcado com hidrogênio radioativo. Incube pela duração necessária.
O tampão pré-aquecido fornece temperatura fisiológica e um pH apropriado necessário para a absorção celular de glutamina. Os transportadores de glutamina consistem em domínios de transporte - responsáveis pela translocação do substrato via co-transporte acoplado a íons de sódio - e domínios de andaime ancorados na membrana.
O domínio de transporte se liga à glutamina radiomarcada junto com os íons de sódio do tampão. Ao se ligar, ele libera as moléculas no citoplasma. Simultaneamente, o domínio de transporte transloca íons de sódio intracelulares e aminoácidos neutros para fora da célula, resultando em homeostase celular.
Lave as células com tampão gelado, encerrando a reação e removendo qualquer glutami
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