Ensaio de piruvato para estimativa dos níveis de piruvato em frações celulares de vermes

Os níveis celulares de piruvato - um intermediário chave nas vias bioquímicas de produção de energia - podem ser estimados usando ensaios colorimétricos baseados em enzimas.

Para determinar os níveis de piruvato nas células de Caenorhabditis elegans - um nematóide não parasita - pegue uma fração celular preparada a partir de vermes adultos contendo piruvato. Tratar a solução, retirando as proteínas celulares, e recolher a fracção celular clarificada — a amostra para ensaio — contendo o piruvato. A ausência de proteínas celulares garante uma determinação precisa dos níveis de piruvato.

Comece adicionando um reagente funcional contendo as enzimas piruvato oxidase e peroxidase de rábano e um corante cromogênico. Incubar a mistura no escuro durante um período adequado.

Durante a incubação, a piruvato oxidase reage com o piruvato - seu substrato - gerando peróxido de hidrogênio como subproduto. A ausência de luz impede a decomposição espontânea do peróxido de hidrogênio.

A peroxidase de rábano catalisa a reação entre o peróxido de hidrogênio e o corante cromogênico, produzindo um produto colorido. A intensidade do produto da reação colorida é diretamente proporcional à concentração de p