Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 4:00 min. • July 8th, 2025
A glicogênio sintase - uma enzima crucial na síntese de glicogênio - cliva a glicose difosfato de uridina, ou UDP-glicose - um açúcar nucleotídico - em UDP e resíduo de glicosila e adiciona o monômero de glicose liberado à cadeia de glicogênio em crescimento.
Para estimar a atividade da glicogênio sintase, comece tomando uma mistura de reação contendo glicogênio, UDP-glicose, ATP, fosfoenolpiruvato e nicotinamida adenina dinucleotídeo, ou NADH, em um tubo. Adicione o nucleosídeo difosfato, ou NDP, enzima quinase e um coquetel de enzimas piruvato quinase e lactato desidrogenase. Misture o conteúdo e incuba.
Adicione uma amostra contendo glicogênio sintase ao tubo para iniciar a reação enzimática.
A glicogênio sintase atua na UDP-glicose, gerando UDP e um resíduo de glicosil. A enzima absorve o monômero de glicose livre e o incorpora à cadeia de glicogênio da mistura de reação. Na presença de ATP, a NDP quinase da mistura de reação fosforila o UDP não utilizado, convertendo-o em UTP e gerando ADP.
A enzima piruvato quinase atua no ADP e adiciona um fosfato doado pelo fosfoenolpiruvato da mistura de reação para produzir ATP e piruvato. Em seguida, a lactato desidrogenase converte o pi
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