Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:35 min. • July 8th, 2025
As células geram baixos níveis de radicais livres durante os processos metabólicos.
Em condições patológicas, ocorre a superprodução de radicais livres, causando estresse oxidativo. Esses radicais livres atacam os ácidos graxos poliinsaturados nos fosfolipídios da membrana celular em um processo chamado peroxidação lipídica. Isso forma produtos de oxidação tóxicos, incluindo hidroperóxidos lipídicos e malondialdeído (MDA), que causam danos à membrana e morte celular.
Para detectar o estresse oxidativo no soro humano in vitro usando o ensaio de substância reativa ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), comece com um tubo contendo soro humano tratado com um composto indutor de oxidação. O soro tratado compreende principalmente produtos de peroxidação lipídica - MDA e hidroperóxidos lipídicos - juntamente com fosfolipídios, lipídios e proteínas.
Em seguida, adicione dodecil sulfato de sódio (SDS) e misture para solubilizar os lipídios e liberar o MDA. O SDS desnatura quaisquer proteínas contaminantes. Adicione um tampão ácido adequado, seguido de ácido tiobarbitúrico ácido (TBA). Incubar a alta temperatura.
Sob condições ácidas e altas temperaturas, as moléculas de TBA reagem com o MDA, form
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