Ensaio de brotamento de coróide para estudar a proliferação microvascular ocular ex vivo

No olho dos mamíferos, a coroide, localizada entre a esclera e a retina, contém macrófagos perivasculares e o coriocapilar – uma camada de capilares sanguíneos revestidos por pericitos que fornece oxigênio e nutrientes para a retina. O vaso sanguíneo anormal que brota do coriocapilar ocorre em várias doenças oculares vasculares.

Para estudar o brotamento de coriocapilares desregulados ex vivo, tome explantes de olhos de camundongo colhidos contendo a coróide ligada à esclera e ao epitélio pigmentar da retina, ou RPE.

Adicione gotículas de extrato de membrana basal, ou BME - um hidrogel enriquecido em proteínas da matriz extracelular - aos poços de uma placa de vários poços. Coloque os explantes na gota, evitando o achatamento do tecido. Deixe o BME solidificar.

Adicione meio suplementado com células endoteliais ou fatores de crescimento específicos da CE. Incubar. O EPR secreta fator de crescimento endotelial vascular, que, juntamente com os fatores de crescimento específicos da CE, estimula a proliferação capilar da CE.

O BME solidificado forma uma matriz extracelular que promove os CEs em proliferação para formar túbulos capilares germinativos. Os pericitos migram e se ligam a es