Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:52 min. • July 8th, 2025
Os neurônios em desenvolvimento estendem os processos citoplasmáticos de seus corpos celulares por crescimento de neuritos para desenvolver dendritos e axônios, que são essenciais para a comunicação neurônio a neurônio.
Para estudar o efeito de uma proteína-alvo no crescimento de neuritos, pegue uma placa multipoços com uma lamínula revestida com poli-D-lisina em sua base. A superfície da lamínula tem uma cultura aderente de neurônios corticais primários derivados do cérebro embrionário de ratos.
Trate os neurônios com uma mistura contendo dois tipos de plasmídeos - um plasmídeo EGFP que codifica a proteína fluorescente verde aprimorada e um segundo plasmídeo que codifica a proteína-alvo em um reagente de transfecção adequado.
O reagente de transfecção facilita a entrada dos plasmídeos nas células.
Após a transfecção, ambos os plasmídeos são expressos, produzindo proteínas fluorescentes verdes e proteínas-alvo. A expressão de EGFP confere fluorescência verde às células co-transfectadas.
As proteínas-alvo com potencial estimulador do crescimento de neuritos iniciam a sinalização celular, que promove a reorganização do citoesqueleto e leva ao desenvolvimento de projeções neuronais e
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