Ensaio de complementação de luciferase dividida para identificar interações proteína-proteína específicas

As interações proteína-proteína são cruciais para as funções celulares vitais.

Para estudar as interações entre proteínas transmembranares - proteínas de membrana que abrangem a bicamada lipídica da membrana celular, comece com os poços de uma placa de vários poços contendo uma cultura de células de mamíferos aderentes.

Em seguida, adicione uma solução contendo um agente de transfecção adequado e um par de plasmídeos de expressão.

Um dos plasmídeos de expressão codifica uma proteína transmembrana de interesse fundida ao pequeno fragmento não funcional da enzima luciferase; o outro plasmídeo codifica uma segunda proteína transmembrana de interesse fundida ao grande fragmento não funcional da enzima luciferase.

Incube a placa. O agente de transfecção facilita a captação celular dos plasmídeos de expressão.

As células transfectadas com sucesso expressam as proteínas transmembranares. A interação entre as proteínas transmembranares expressas aproxima os fragmentos pequenos e grandes voltados para o citoplasma, fazendo com que eles se liguem e formem a enzima luciferase ativa.

Substitua o meio nos poços por meio sem soro para minimizar a luminescência de fundo. Adicione a solução de fur