Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:02 min. • July 8th, 2025
A microesfera-PCR usa uma esfera de tamanho micro acoplada a oligonucleotídeos em sua superfície, o que permite a amplificação preferencial do DNA de fita simples.
Para iniciar a microesfera-PCR, pegue uma mistura de reação contendo fitas de DNA de fita simples molde, primers diretos com uma etiqueta de nucleotídeo adicional, DNA polimerase termoestável, dNTPs e microesferas exibindo sondas de oligonucleotídeos de fita simples.
Coloque o tubo em um termociclador e funcione nas condições definidas.
No primeiro ciclo, na temperatura de recozimento, o DNA molde se liga à sonda na superfície da microesfera, de modo que o DNA molde funcione como a fita sensorial. Durante a extensão, a polimerase estende o DNA e o duplex permanece ligado à microesfera.
No ciclo seguinte, durante a desnaturação, o DNA molde se separa da microesfera, deixando a fita da sonda ligada à superfície - servindo como modelo para uma nova fita.
Durante o recozimento, o primer marcado se liga à fita antisense. Mais tarde, a polimerase o estende para sintetizar a fita sensorial com a etiqueta de nucleotídeos.
Repita o ciclo várias vezes para gerar várias cópias do DNA de fita simples sensorial, que vão para a soluçã
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