Técnicas de PCR

Este vídeo demonstra o papel da reação em cadeia da polimerase de gotículas digitais na identificação da mutação indel em uma amostra de DNA. A alta precisão e sensibilidade do ddPCR permitem a detecção precisa e consistente de mutações raras presentes em uma amostra, mesmo em níveis baixos. Ele pode identificar e quantificar mutações indel em diferentes regiões do genoma, fornecendo informações valiosas sobre os mecanismos de mutação e as consequências funcionais dessas mutações.

Este vídeo demonstra a reação em cadeia da polimerase gradiente para otimização da temperatura de recozimento dos primers, que define a temperatura de recozimento gradiente ao longo dos poços. O efeito de diferentes temperaturas de recozimento é determinado pelo rendimento de produtos amplificados que ajudam a otimizar a condição de reação.

Neste vídeo, demonstramos a técnica de PCR digital duplex (ddPCR) - uma modificação da técnica tradicional de PCR que é útil na detecção de dois marcadores genéticos diferentes simultaneamente. Uma única reação de PCR é particionada em gotículas emulsionadas do tamanho de nanolitros que são amplificadas independentemente, e a detecção de sinais de amplificação de fluorescência de cores diferentes da fração de gotículas é usada para calcular a concentração inicial das sequências alvo.

Este vídeo demonstra um método quantitativo para detectar infecção viral usando PCR de transcrição reversa em tempo real. A etapa de transcrição reversa converte o RNA em cDNA, que é então amplificado por meio de ciclos de PCR. A presença de RNA viral na amostra é confirmada pela análise das curvas de amplificação e dissociação do DNA obtido a partir da PCR.

Este vídeo descreve a reação em cadeia da polimerase bloqueadora do tipo selvagem, ou WTB-PCR, que detecta mutações somáticas. A técnica baseada em PCR usa um ácido nucléico bloqueado, ou LNA, um oligonucleotídeo que se liga ao seu alelo complementar do tipo selvagem e bloqueia seu alongamento. O bloqueio permite seletivamente a amplificação de alelos mutantes de baixo nível sobre suas variantes de tipo selvagem na amostra.

Neste vídeo, discutimos a reação em cadeia da polimerase quantitativa, qPCR, para enumerar bacteriófagos T7 por meio da quantificação do DNA. O corante fluorescente na mistura de PCR se liga às fitas de DNA recém-sintetizadas e emite fluorescência, que é medida.

Este vídeo descreve a técnica de amplificação de DNA de fita simples usando microesferas de polímero revestidas com oligonucleotídeos em uma reação de tubo único. Este processo produz DNA puro de fita simples, que pode ser usado posteriormente para sequenciamento de DNA e análise de microarray.

Este vídeo descreve a reação em cadeia da polimerase aninhada, uma técnica que consiste em dois processos sequenciais de amplificação por PCR usando dois conjuntos de primers. O primeiro conjunto de primers destina-se a recozer as sequências a montante do segundo conjunto, resultando na amplificação seletiva de sequências de genes específicos. Esta PCR é mais sensível e específica do que uma PCR normal e é amplamente utilizada como técnica de detecção para várias doenças.

Neste vídeo, descrevemos uma técnica de PCR de fusão de alta resolução para determinar o polimorfismo de comprimento de fragmentos de DNA de comprimentos de sequência variados, com base na análise da temperatura de fusão.

Este vídeo demonstra a técnica de reação em cadeia da polimerase por gotículas multiplex para a quantificação simultânea de regiões de DNA metilado em diferentes populações de glóbulos brancos como um biomarcador precoce para diagnóstico clínico e prognóstico.

Este vídeo demonstra a utilidade da PCR digital em um formato chip-in-a-tube para a detecção de variações de nucleotídeo único em amostras de DNA. Uma única reação de PCR é particionada em câmaras que atuam como reações de PCR independentes, e a detecção de sinais de fluorescência dos alvos amplificados nas câmaras é usada para calcular a frequência do alelo variante na amostra.

Este vídeo demonstra a PCR digital baseada em chip — uma variação da técnica de PCR digital que é útil na detecção de variantes raras de transcrição. A reação de PCR é particionada nas câmaras de um chip nanofluídico, cada um dos quais atua como uma reação independente. A detecção de sinais de fluorescência das câmaras com alvos amplificados confirma a presença de variantes raras de transcrição na amostra.