Western Blotting de célula única para determinar a heterogeneidade celular

Os locais de inflamação contêm várias células imunológicas, incluindo monócitos, macrófagos e leucócitos.

Para identificar uma população de células heterogêneas por western blotting unicelular, pegue um chip de blotting pré-hidratado, consistindo em um gel de poliacrilamida fotoativável padronizado em blocos. Cada bloco possui vários micropoços. A padronização em vários blocos captura várias células em paralelo.

Adicionar uma suspensão contendo uma população celular heterogénea. As dimensões do poço permitem que células individuais se assentem. Mergulhe o chip em uma câmara de eletroforese cheia de um tampão apropriado. As moléculas de detergente no tampão rompem a membrana da célula, liberando conteúdo celular.

Aplique um campo elétrico. As proteínas liberadas migram através do gel, separando-se em bandas de tamanhos distintos. Lave o chip com um tampão de lavagem para remover moléculas não especificamente ligadas, deixando apenas proteínas celulares, incluindo as proteínas marcadoras desejadas.

Exponha o gel à luz UV, ativando sua superfície e imobilizando as proteínas.

Adicione um coquetel de anticorpos primários que se ligam especificamente a proteínas marcadoras distintas de c