Técnicas de Blot

Neste vídeo, descrevemos o ensaio de dot blot para quantificar um genoma viral. A intensidade do sinal está diretamente relacionada à quantidade de DNA viral na amostra.

Este vídeo descreve a técnica de dot-blot para determinar o nível de metilação do DNA em condrócitos humanos in vitro por meio do blotting de amostras de DNA em uma membrana de náilon e a visualização subsequente usando anticorpos monoclonais. Isso ajuda a determinar o fenótipo dos condrócitos em vários estágios da cultura.

Este vídeo demonstra uma técnica quantitativa de dot blot, ou QDB, para a quantificação absoluta de proteínas de interesse em uma amostra de tecido. As proteínas da amostra são imobilizadas na membrana de nitrocelulose dentro dos poços de uma placa QDB. Utilizando anticorpos específicos da proteína-alvo marcados com uma enzima peroxidase, um substrato quimioluminescente é oxidado para produzir luz, que é medida para determinar a concentração de proteína da amostra.

O vídeo demonstra uma técnica de western blotting baseada em normalização total de proteínas para quantificar a expressão da proteína-alvo em uma amostra. Ao utilizar a coloração de proteína total da amostra, uma análise raciométrica é realizada para determinar o nível de expressão relativa da proteína alvo.

O vídeo descreve uma técnica de western blotting de célula única que identifica a composição de células individuais capturadas em um chip de western blotting de célula única em uma suspensão heterogênea. A técnica detecta a intensidade de fluorescência do fluoróforo marcado com um marcador de proteína específico para a célula-alvo.

Este vídeo descreve o western blotting baseado em quimioluminescência de lisados imunoprecipitados. A técnica ajuda a determinar o processamento e a ativação de proteínas. O sinal quimioluminescente detectado é proporcional ao nível de processamento da proteína durante sua ativação.

Neste vídeo, descrevemos a técnica de Southern blotting para identificar eventos de recombinação homóloga no genoma de células-tronco embrionárias de camundongos usando sondas radiomarcadas. As regiões de DNA contendo eventos de recombinação homóloga aparecem como bandas distintas quando a membrana contendo o DNA ligado à sonda é exposta a raios-X.

Neste vídeo, demonstramos o northern blot, uma técnica de hibridização para detectar e quantificar microRNAs (miRNAs) do RNA total extraído do tecido vegetal.