Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 5:16 min. • July 8th, 2025
Para detectar interações antígeno-anticorpo usando fotometria em massa, primeiro, incube a concentração desejada de antígenos e anticorpos purificados pelo período de tempo necessário, facilitando a ligação antígeno-anticorpo. Com base na estequiometria da ligação ao antígeno, as regiões paratópicas desses anticorpos podem ter números variados de antígenos ligados.
Flua na solução contendo os anticorpos livres junto com os complexos antígeno-anticorpo através de uma câmara de fluxo pré-montada. Prenda a câmara no estágio de microscópio de um fotômetro de massa. Em seguida, direcione o feixe de laser através da câmara de fluxo para obter uma imagem ideal.
Dependendo do número de antígenos ligados a cada anticorpo, a massa molecular dos complexos muda. Essas variações na massa fazem com que os complexos espalhem a luz de maneira diferente.
Complexos com massas moleculares mais altas, onde dois antígenos estão ligados a ambos os parátopos de um único anticorpo, espalham mais luz em comparação com complexos contendo antígenos únicos. Além disso, os anticorpos livres mostram a menor quantidade de dispersão de luz.
Um detector coleta a luz espalhada e mede sua frequência e intensidade. O
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