Sonda de peptídeo penetrante de células biotiniladas para detectar interações proteína-proteína

Nas células, as proteínas se ligam às suas proteínas de interação por meio de sequências específicas em sua estrutura - modulando o funcionamento das proteínas intracelulares.

Para detectar interações de proteínas intracelulares, faça uma cultura de células aderentes. Aspire o meio.

Adicione um peptídeo de penetração celular biotinilado, solução de BCPP e incube.

Cada BCPP contém uma sequência peptídica que ajuda na ligação específica à proteína intracelular alvo. O peptídeo tem um peptídeo que penetra nas células, CPP, no terminal N do peptídeo e biotina no terminal C para facilitar a detecção.

Durante a incubação, a região CPP carregada positivamente facilita a entrada do peptídeo ligado através da membrana da célula, atingindo o citoplasma. O peptídeo se liga ao seu parceiro de proteína de interação intracelular - formando um complexo de proteína alvo BCPP.

Adicione um tampão contendo moléculas de detergente que rompem a membrana da célula e liberam complexos de proteínas-alvo BCPP e outros componentes celulares.

Adicione uma solução de avidina ligada a grânulos de agarose - uma glicoproteína que se liga especificamente à biotina em BCPPs. Incubar, permitindo a ligação irreversí