Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 6:05 min. • July 8th, 2025
A espectroscopia de ressonância magnética nuclear, ou RMN, permite a detecção de interação proteína-proteína em nível atômico.
Para estudar as interações entre proteínas globulares e helicoidais, rotule proteínas globulares purificadas do tipo selvagem ou mutantes com 15N - um isótopo de nitrogênio. Em um tubo de RMN, misture as proteínas globulares e helicoidais não marcadas em um solvente contendo um padrão de RMN. Insira o tubo no espectrômetro de RMN.
Os ímãs do espectrômetro geram um forte campo magnético, alinhando os 15núcleos de proteínas globulares marcados com N paralelos ao campo. Um pulso de radiofrequência, ou RF, excita os 15núcleos N para se alinharem antiparalelos ao campo.
A frequência de pulso necessária para a transição de núcleos de 15N entre os dois estados define a frequência de ressonância. A normalização da frequência de ressonância de 15N para o padrão de RMN mede o deslocamento químico de 15N.
O campo magnético é ajustado para alinhar os núcleos 1H - ligados a 15N - paralelos ao campo. Os pulsos de RF são ajustados e o deslocamento químico de 1H é registrado.
Durante as interações proteicas, o ambiente químico ao redor dos resíduos de aminoácidos em intera
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