Usando a exibição de fagos para selecionar proteínas com alta afinidade com uma proteína-alvo

Comece a exibição de fagos adicionando uma biblioteca de fagos aos poços de uma placa de vários poços, revestida com proteína-alvo. A biblioteca de fagos contém fagos geneticamente modificados, cada um exibindo uma variante de proteína individual fundida a uma proteína de revestimento em sua superfície. Incubar, permitindo que o fago e as proteínas-alvo interajam.

Fagos com proteínas com alta afinidade por proteína-alvo ligam-se à proteína-alvo. Lave com um tampão, removendo os fagos não ligados. Adicione uma solução ácida, interrompendo as interações entre o fago e a proteína-alvo, liberando fagos na solução. Neutralize o pH da solução usando um tampão, mantendo a estabilidade do fago.

Transfira os fagos para um novo tubo. Incubar com uma solução de bloqueio contendo proteínas, evitando interações inespecíficas.

Transfira os fagos para uma suspensão de E. coli que se divide ativamente, infectando bactérias e iniciando o ciclo de replicação do fago. Suplemento com fagos auxiliares, que infectam as bactérias, fornecendo proteínas de revestimento necessárias para embalar os fagos da progênie. Transfira a suspensão para um meio seletivo, permitindo o crescimento de bactérias infectada