Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 7:05 min. • July 8th, 2025
Para identificar os locais de ligação de uma proteína-alvo no DNA, comece com células precursoras de oligodendrócitos contendo uma proteína-alvo reticulada a sequências específicas de DNA na cromatina.
Trate as células com um tampão de lise contendo inibidores de protease. O tampão de lise lisa as células, enquanto os inibidores inativam proteases para reter a integridade dos complexos proteína-cromatina.
Sonicar o conteúdo para cisalhar os complexos em fragmentos menores de cromatina, com alguns retendo a proteína alvo.
Centrifugue para pellet os componentes da célula e transfira o sobrenadante contendo fragmentos de cromatina para um novo tubo. Incubar com anticorpos anti-alvo que se ligam especificamente à proteína-alvo nos fragmentos de cromatina.
Complemente o tubo com esferas magnéticas revestidas com proteína A que se ligam à região Fc de anticorpos pré-ligados. Aplique um campo magnético para precipitar seletivamente as proteínas-alvo ligadas a anticorpos complexadas com fragmentos de cromatina.
Trate os complexos de esferas com um tampão de eluição com alto teor de sal para interromper as interações proteína-cromatina e liberar o DNA nu sem proteínas associadas.
Use solven
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos