Citometria de fluxo quantitativa para estudar interações proteína-fosfolipídio veicular marcadas

As interações proteína-fosfolipídio na membrana celular são cruciais para a regulação de diversos processos celulares.

Para detectar interações proteína-fosfolipídio alvo in vitro usando citometria de fluxo quantitativa, pegue um tubo contendo uma concentração desejada de imitação de membrana celular - vesículas fosfolipídicas marcadas com corante lipofílico de tamanho mícron - em tampão.

Adicione uma concentração apropriada de diferentes proteínas-alvo marcadas com fluorescência em solução.

Injectar a suspensão no citómetro de fluxo. Defina os parâmetros do sistema fluídico para uma taxa de fluxo baixa para permitir tempo suficiente para as interações proteína-fosfolipídio.

À medida que as proteínas marcadas com fluorescência e as vesículas fosfolipídicas interagem no canal de fluxo, a concentração de proteínas ligadas às vesículas aumenta.

À medida que esses complexos passam pelos feixes de laser de canais de fluorescência específicos que fornecem comprimentos de onda apropriados, eles ficam excitados. Essas proteínas excitadas e vesículas fosfolipídicas no complexo emitem os respectivos sinais de fluorescência após o relaxamento para o estado fundamental, que são capturados pelo