Espectroscopia quantitativa de RMN de hidrogênio na célula para monitorar interações proteína-ligante

Para monitorar as interações das proteínas-alvo com ligantes de teste de moléculas pequenas em um ambiente celular nativo, comece com um tubo de RMN preenchido com um tampão contendo um tampão de gel na base. Injete as células que expressam proteínas-alvo, incorporadas em agarose no tubo de RMN, formando estruturas semelhantes a fios.

Carregue o tubo na unidade de fluxo de um biorreator, fornecendo um meio de crescimento para manter a viabilidade celular. Insira a unidade de fluxo dentro de um instrumento de ressonância magnética nuclear ou RMN.

Sob um forte campo magnético, os núcleos atômicos dos átomos de hidrogênio das proteínas são magnetizados e se alinham paralelamente ao campo, adaptando-se a um estado de baixa energia.

Aplique um pulso de radiofrequência, fazendo com que os núcleos se alinhem antiparalelamente ao campo magnético, permitindo que eles façam a transição para estados de energia mais alta.

Após um breve pulso, os núcleos retornam à sua posição original, emitindo energia absorvida. O detector captura essa energia, gerando um espectro de RMN que representa as frequências de ressonância do átomo de hidrogênio. Cada pico espectral corresponde a um átomo de hidrogên