Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 4:19 min. • July 8th, 2025
Um oligômero de proteína é um complexo de várias subunidades de proteína que são unidas para formar uma unidade funcional maior.
Para determinar o peso molecular dos monômeros de proteínas e seus oligômeros em solução por SEC-MALS, uma combinação de cromatografia de exclusão de tamanho e espalhamento de luz multiangular, comece com uma coluna de cromatografia de exclusão de tamanho, ou SEC.
A coluna contém esferas de gel esféricas porosas semelhantes a peneiras que prendem moléculas de tamanho menor dentro delas. Equilibre a coluna com um tampão compatível com o estado nativo da proteína.
Colocar uma amostra contendo monómeros e oligômeros de proteínas no topo da coluna.
Durante o fluxo, os oligômeros passam pelo espaço interpartícula da coluna, enquanto os monômeros ficam presos nos poros dos grânulos. Isso faz com que os oligômeros de proteínas de tamanho maior viajem mais rápido do que os monômeros de tamanho menor.
Direcione os oligômeros de eluição rápida, seguidos pelos monômeros de eluição lenta, para o detector MALS.
À medida que passam pelo detector, uma luz laser os ilumina, que se espalha em diferentes ângulos. Os oligômeros de múltiplas subunidades espalham mais luz do
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