Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Técnicas Biológicas
0 visualizações • 3:35 min. • July 8th, 2025
Para estudar as interações receptor-ligante, comece com uma placa de vários poços contendo meios com células-alvo expressando ligantes de teste em sua superfície.
Adicione células BW de camundongo projetadas - uma nova população de células B que expressa receptores quiméricos ligados à membrana. Os receptores quiméricos compreendem o domínio extracelular de um receptor específico fundido ao domínio transmembrana e de sinalização intracelular do receptor de células B.
Os ligantes nas células-alvo interagem com o domínio extracelular dos receptores quiméricos das células BW, causando a ativação do domínio de sinalização intracelular nas células BW. Isso desencadeia a sinalização a jusante e a produção de citocinas - moléculas repórter secretoras que são liberadas fora das células BW, aparecendo na mídia.
Centrifugue a placa. Transferir o sobrenadante contendo citocinas para uma placa ELISA pré-revestida com anticorpos anticitocinas. As citocinas interagem com as regiões Fab dos anticorpos, levando à sua imobilização na superfície da placa.
Trate a placa com uma solução de bloqueio para bloquear locais de ligação não específicos. Adicione anticorpos anticitocinas biotinilados, que int
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos