Sonda de força de biomembrana para quantificar as interações receptor-ligante

A interação entre um receptor de célula T, TCR, e um peptídeo antigênico apresentado pelo MHC, ou complexo principal de histocompatibilidade, em uma célula apresentadora de antígeno, APC, faz com que a célula T exerça uma força mecânica sobre o APC. Este fenômeno é necessário para a ativação das células T.

Para quantificar as interações receptor-ligante usando uma sonda de força de biomembrana, BFP, comece com uma câmara celular personalizada baseada em lâminas. Coloque a câmara celular sob um microscópio.

Injete suspensões de hemácias inchadas biotiniladas, esferas de vidro de sonda revestidas com complexos MHC-estreptavidina-biotina ligados a peptídeos e células T na câmara. Posicione a sonda, o alvo e as micropipetas cheias de tampão auxiliares ao redor da câmara.

Aspirar um eritrócitos biotinilado com a pipeta de sonda, posicionando-o numa área em branco. Aspire uma célula T com a micropipeta alvo, posicionando-a à direita das hemácias. Aspire um cordão de sonda com a micropipeta auxiliar e conecte-o ao ápice das hemácias. A estreptavidina do grânulo se liga à biotina do RBC e forma uma sonda de força.

Alinhe a célula T com a sonda de força para permitir que o TCR interaja com