Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:08 min. • July 8th, 2025
Mastócitos - glóbulos brancos especializados, contêm grânulos secretores ricos em enzimas lisossômicas, como a beta-hexosaminidase.
Para realizar a degranulação de mastócitos - um processo que envolve a liberação de grânulos secretores, comece com uma placa de vários poços contendo uma suspensão de mastócitos peritoneais murinos pré-tratada com imunoglobulinas.
Trate as células com um produto químico alvo. O produto químico alvo com potencial estimulante interage com imunoglobulinas pré-ligadas nos receptores específicos dos mastócitos. Isso ativa o movimento de grânulos contendo beta-hexosaminidase para a superfície celular, liberando-a na solução.
Centrifugue a placa para peletar as células e transfira o sobrenadante contendo enzimas para um poço vazio de uma placa nova. Trate os pellets celulares com um tampão de lise para lisar as células e liberar seu conteúdo no lisado, incluindo beta-hexosaminidase intracelular.
Adicione o lisado contendo enzimas em outro poço da mesma placa de vários poços. Trate os dois poços com o substrato da enzima, p-nitrofenil-acetil-D-glucosamina, e incuba. As enzimas hidrolisam os substratos, liberando p-nitrofenóis - um produto colorido que torna a
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