Isolamento e cultura de células de Kupffer de camundongo

As células de Kupffer são macrófagos residentes localizados nos sinusóides hepáticos que ajudam a proteger o fígado de infecções.

Para isolar as células de Kupffer de camundongo, pegue um fígado de camundongo perfundido recém-colhido em um prato que contenha meio. A etapa de perfusão hepática com colagenase digere a matriz extracelular, causando dissociação das células hepáticas.

Rompa a cápsula hepática para liberar as células hepáticas dissociadas, incluindo células parenquimatosas, PCs e células não parenquimatosas, NPCs, incluindo as células de Kupffer, células endoteliais, células estreladas e os eritrócitos restantes.

Filtro para remover detritos. Realize centrifugação diferencial de baixa velocidade no filtrado para sedimentar seletivamente os PCs. Colete o sobrenadante contendo NPC. Centrifugue para concentrar as células.

Ressuspenda as células em meio e camada em um gradiente de densidade isotônico descontínuo com duas camadas de mídia gradiente de densidades diferentes. Com a centrifugação, as células se separam com base em sua densidade em relação ao meio gradiente.

Colete a camada NPC enriquecida na interfase da camada de gradiente. Transferir para um tubo contendo meio