Isolamento de células mononucleares do sangue periférico de revestimentos de buffy humanos

As células mononucleares do sangue periférico, PBMCs, consistem em uma população heterogênea de células imunes especializadas, incluindo linfócitos, monócitos e células dendríticas.

Para isolar PBMCs, comece com um tubo contendo um sangue de camada leucocitária humana recém-obtido. O sangue do revestimento leucocitário contém PBMCs, juntamente com granulócitos com núcleos multilobados, eritrócitos e plaquetas suspensas no plasma.

Sobreponha cuidadosamente a suspensão do revestimento leucocitário sobre um volume igual de um meio de gradiente de densidade com uma densidade específica desejada que seja ideal para a separação de PBMC.

Durante a centrifugação, os diferentes tipos de células se separam em camadas distintas, com base nas densidades celulares em relação ao meio gradiente. Além disso, os polissacarídeos no meio de gradiente de densidade promovem a agregação e sedimentação eritrocitária.

Os eritrócitos e granulócitos com densidades mais altas sedimentam no fundo do tubo, enquanto o plasma, com a densidade mais baixa, forma a camada superior. Os PBMCs, que têm densidades mais baixas do que o meio de gradiente de densidade, formam uma camada branca turva na interface do meio d