Isolamento e purificação de células B do sangue periférico humano

Para realizar a separação imunomagnética negativa das células B, colete sangue periférico humano em um tubo contendo anticoagulante para evitar a coagulação do sangue. Adicione glóbulos vermelhos, hemácias, tampão de lise para lisar as hemácias sem afetar outras células sanguíneas.

Centrifugue para sedimentar as células sanguíneas intactas e mais densas das hemácias menos densas, que permanecem no sobrenadante. Descarte o sobrenadante. Ressuspenda o pellet em meio fresco.

Transfira as células para uma placa de cultura. Incubar para permitir que os macrófagos e monócitos adiram à placa enquanto as células não aderentes, incluindo as células B, permanecem em suspensão.

Recolher as células em suspensão para um novo tubo. Centrifugue para pellet as células e ressuspenda-as em um tampão.

Adicionar uma solução de cocktail contendo anticorpos biotinilados específicos para células sanguíneas que não sejam células B. Os anticorpos se ligam a antígenos na superfície de células não B, deixando as células B sem marcação.

centrifuga. Rejeitar o sobrenadante que contém anticorpos não ligados.

Adicione uma solução de esferas magnéticas conjugadas com estreptavidina. Durante a incubação, a estrept