Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:20 min. • July 8th, 2025
As células B secretoras de anticorpos, ou ASCs, são células B diferenciadas que secretam isotipos de anticorpos, incluindo IgG e IgM, para garantir proteção contra patógenos.
Para realizar uma avaliação funcional das ASCs in vitro, comece com o ensaio de ponto de imunoabsorção enzimática. Pegue uma placa ELISpot contendo uma membrana de fluoreto de polivinilideno ativado na base.
Incubar os poços com fragmentos de anticorpos policlonais contendo exclusivamente regiões Fab sem a região Fc do anticorpo. Cada região Fab tem um local de ligação para isotipos específicos de anticorpos - IgG ou IgM, permitindo a identificação de ambos os isotipos.
Durante a incubação, os fragmentos de anticorpos se ligam à membrana, levando à imobilização.
Cubra os poços com soluções de bloqueio para evitar ligações não específicas. Semeie a placa com células B secretoras de anticorpos ativadas e incuba. Os ASCs secretam diferentes isotipos, incluindo IgG e IgM, que se ligam aos fragmentos de anticorpos ligados à membrana.
Lave a placa com um tampão para remover os anticorpos secretados não ligados. Trate alguns poços com anticorpos de detecção conjugados com enzimas para IgM e outros com anticorpos de d
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