Isolamento e cultura de células estromais da medula óssea de uma tíbia de camundongo

As células estromais da medula óssea, BMSCs - progenitores de linhagens de tecido esquelético - residem dentro da cavidade da medula óssea junto com uma população de células heterogêneas, incluindo células-tronco hematopoiéticas, HSCs e células sanguíneas diferenciadas.

Para isolar BMSCs, comece com uma tíbia de camundongo recém-colhida. Corte as extremidades proximal e distal do osso para expor a cavidade da medula óssea. Coloque o osso cortado em um tubo de microcentrífuga adaptado contendo meio.

Centrifugue em alta velocidade para remover a medula óssea do osso e formar um pellet de medula óssea no fundo do tubo. Remova o osso do tubo. Usando uma agulha presa a uma seringa, triture a medula óssea para quebrar os aglomerados.

Adicione meio à suspensão. Filtre através de um filtro de células de tamanho de malha apropriado para remover os fragmentos ósseos. Colocar o filtrado que contém as células da medula óssea numa placa de cultura de plástico.

Durante a incubação pelo período adequado, as BMSCs aderem ao fundo da placa de cultura plástica e proliferam, enquanto as células não aderentes, incluindo HSCs, permanecem em suspensão.

Descarte o meio que contém as células não aderentes