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Imunologia
0 vistas • 3:03 min • July 8th, 2025
Os adipócitos, ou células armazenadoras de gordura, são as células predominantes do tecido adiposo - que secretam adipocinas - moléculas de sinalização imunológica que regulam a resposta imune.
Para gerar adipócitos in vitro, comece com uma placa de vários poços contendo uma cultura aderente de células estromais da medula óssea de camundongos, BMSCs, - células multipotentes indiferenciadas.
Trate as células com um meio de indução de adipócitos contendo inibidores da enzima fosfodiesterase e dexametasona - um glicocorticóide sintético - para desencadear a diferenciação das células.
Os inibidores entram nas células e desativam as fosfodiesterases de nucleotídeos cíclicos, enzimas essenciais para a degradação do monofosfato de adenosina cíclico, ou cAMP. Essa inibição resulta em aumento dos níveis intracelulares de cAMP, críticos para a diferenciação celular.
A dexametasona se liga a receptores intracelulares nas BMSCs e entra no núcleo para ativar genes envolvidos na síntese e acúmulo de lipídios. Isso induz a diferenciação de BMSCs em pré-adipócitos - as células precursoras de adipócitos maduros.
Substitua o meio gasto por um meio de indução novo para manter os pré-adipócitos. Após um período específico, trate as células com um meio de base de adipócitos contendo glicose e insulina altas.
A insulina se liga aos seus receptores específicos da superfície celular e ativa a translocação de transportadores de glicose na superfície celular, facilitando a captação de glicose nos pré-adipócitos. As células utilizam o excesso de glicose para sintetizar as gotículas lipídicas, levando à adipogênese - o processo de acúmulo de lipídios - que promove a diferenciação em adipócitos maduros.
Trate as células com um corante de coloração lipídica e observe-as ao microscópio óptico. Os adipócitos maduros aparecem como células redondas com várias gotículas lipídicas vermelhas.
Para induzir a diferenciação de adipócitos de células-tronco da medula óssea, substitua o meio de cultura de células de uma cultura de células de medula óssea confluente por meio de indução de adipócitos. Após dois dias de cultura, substitua o sobrenadante por meio de indução de adipócitos fresco, mudando para meio à base de adipócitos no dia 4. No dia 7, confirme que as células acumularam gotículas lipídicas e que a exibição do fenótipo é semelhante aos adipócitos maduros.