Um método in vitro para a diferenciação de megacariócitos e formação de plaquetas

Os megacariócitos são células grandes e multinucleadas que dão origem às plaquetas, essenciais para a coagulação do sangue.

Para produzir plaquetas in vitro, faça uma cultura em suspensão de células-tronco hematopoiéticas e progenitoras, HSPCs, derivadas do sangue do cordão umbilical humano.

Adicione trombopoetina e incube em condições fisiológicas. A trombopoetina se liga ao seu receptor nas HSPCs, desencadeando eventos de sinalização que levam à diferenciação das HSPCs em megacariócitos imaturos.

As células imaturas passam por um processo de maturação para formar megacariócitos amadurecidos. As células amadurecidas são grandes e contêm grânulos secretores citoplasmáticos. Eles possuem um núcleo poliplóide multiplóide e um sistema de membrana invaginada no citoplasma.

Megacariócitos amadurecidos produzem extensões citoplasmáticas longas e finas - proplaquetas. As proplaquetas - vários inchaços do tamanho de plaquetas ligados por finas pontes citoplasmáticas - são liberadas no meio.

As pontes citoplasmáticas se rompem, causando a liberação de plaquetas individuais. Centrifugue para obter as plaquetas como um pellet. Descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet em um tampão conten