Purificação e ativação de plaquetas do sangue total murino

Após a lesão vascular, as plaquetas são recrutadas e ativadas no local da lesão para formar um tampão plaquetário e iniciar o reparo tecidual.

Para purificar as plaquetas do sangue total murino e ativá-las in vitro, tome um meio de gradiente de densidade adequado. Coloque cuidadosamente a amostra de sangue em cima do meio. Centrifugue para separar as plaquetas do plasma e das camadas de glóbulos vermelhos e brancos.

Transfira as plaquetas para dois novos tubos contendo um tampão de coloração adequado. Adicione o tetrapeptídeo GPRP sintético contendo a sequência de aminoácidos glicina-prolina-arginina-prolina a um tubo, seguido de trombina.

A trombina cliva domínios extracelulares específicos dos receptores de trombina da superfície plaquetária, iniciando uma cascata de sinalização a jusante e ativando as plaquetas. Os grânulos das plaquetas ativadas liberam a proteína CD62P, que se transloca rapidamente para a superfície da membrana.

O tetrapeptídeo GPRP bloqueia o fibrinogênio - uma glicoproteína que se liga à integrina CD41 / CD61 que atravessa a membrana nas plaquetas ativadas para iniciar a agregação plaquetária - mantendo assim as plaquetas ativadas em suspensão.

Adicione anti