Isolamento de células de Sertoli imunorreguladoras de túbulos seminíferos de camundongos

Os túbulos seminíferos dos testículos contêm células de Sertoli, que nutrem as células germinativas. As células de Sertoli são conectadas por meio de junções apertadas e estão firmemente ligadas à matriz basal rica em ácido hialurônico. Este arranjo de células de Sertoli regula a entrada das células imunes no túbulo e protege as células germinativas em desenvolvimento da degradação.

Para isolar as células de Sertoli, comece com um tubo contendo túbulos seminíferos parcialmente digeridos derivados de testículos de camundongos. Esses túbulos não possuem células peritubulares - células musculares lisas ao redor dos túbulos seminíferos.

Trate os túbulos com um coquetel enzimático contendo hialuronidase - essencial para a hidrólise do ácido hialurônico - e DNase.

As hialuronidases entram nos túbulos e clivam o ácido hialurônico - um polissacarídeo basal - iniciando o descolamento das células de Sertoli da matriz basal e liberando células germinativas na solução. A DNase digere quaisquer contaminantes de DNA da solução, evitando a agregação celular.

Lave os túbulos digeridos enzimaticamente com um tampão, removendo enzimas residuais, fragmentos celulares e células germinativas. Ressuspen