Caracterização de armadilhas extracelulares de macrófagos em amostras de tecido pulmonar de camundongos

Armadilhas extracelulares de macrófagos, METs, são estruturas semelhantes a teias liberadas por macrófagos para capturar e eliminar patógenos.

Os METs compreendem fibras de cromatina extracelular associadas à metaloproteinase-9 da matriz, MMP-9 e histona citrulinada H3, H3Cit - uma proteína histona modificada na qual a arginina é convertida em citrulina.

Para caracterizar METs em cortes de tecido pulmonar murino fixados em formalina e embebidos em parafina, primeiro seque as lâminas. Mergulhe em xileno para desparafinizar as seções. Use etanol aquoso para reidratar as seções.

Aqueça as seções para quebrar as ligações cruzadas de proteínas induzidas por formalina, expondo os antígenos alvo para subsequente ligação de anticorpos.

Adicione uma solução contendo proteína para bloquear locais de ligação não específicos. Incube com um coquetel de anticorpos primários anti-MMP-9, anti-H3Cit e anti-F4/80.

O anticorpo anti-F4/80 liga-se à glicoproteína F4/80 da superfície celular dos macrófagos. Os anticorpos anti-MMP-9 e anti-H3Cit ligam-se ao MMP-9 e H3Cit em METs, respectivamente. Adicione diferentes anticorpos secundários conjugados com fluoróforos que se ligam aos seus respectivos antic