Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:50 min. • July 8th, 2025
As micropartículas celulares são vesículas ligadas à membrana de tamanho submicrométrico que envolvem biomoléculas liberadas da membrana plasmática de células eucarióticas submetidas à apoptose.
Para gerar micropartículas derivadas de linfócitos T, LMPs in vitro, pegue um frasco de cultura contendo cultura de linfócitos T. Adicione actinomicina-D, um antibiótico. Incubar por um período apropriado.
A actinomicina-D entra nos linfócitos e se transloca para o núcleo. Ele intercala entre pares de bases de DNA específicos, inibindo a transcrição. Isso leva à parada do ciclo celular e ativa a via apoptótica.
No início da apoptose, a caspase-3 ativada cliva e ativa a quinase associada a rho, ROCK1. O ROCK1, por sua vez, fosforila suas proteínas-alvo a jusante, causando a contração da actomiosina, levando ao sangramento da membrana e à subsequente liberação de LMPs contendo os componentes citosólicos e nucleares no meio.
As células eventualmente sofrem apoptose.
Após a incubação, transferir o meio de cultura para um tubo fresco. Centrifugue para pellet os linfócitos T. Transfira o sobrenadante para um novo tubo.
Centrifugue para remover detritos de células grandes. Transfira o sobrenadante
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