Uma técnica para isolar mastócitos primários de uma cavidade peritoneal murina

Os mastócitos - glóbulos brancos contendo grânulos citoplasmáticos cheios de mediadores inflamatórios - desempenham um papel importante nas respostas imunes inatas e adaptativas.

Para isolar mastócitos do tipo tecido conjuntivo da cavidade peritoneal - um espaço cheio de líquido que abriga órgãos abdominais - pegue um camundongo eutanasiado fixado em decúbito dorsal. Faça uma incisão longitudinal até o esterno, expondo a parede abdominal.

A cavidade peritoneal fica abaixo da parede abdominal, contendo fluido que abriga várias células imunes, incluindo macrófagos, linfócitos, leucócitos polimorfonucleares e mastócitos.

Para isolar as células por lavagem peritoneal - aspirando o conteúdo intraperitoneal - injete um meio de crescimento gelado na cavidade peritoneal sem perfurar os órgãos, evitando o vazamento de sangue. O meio frio ajuda a manter a viabilidade celular.

Agite cuidadosamente o mouse por um período adequado, misturando as células imunológicas com o meio. Insira uma seringa vazia na cavidade. Aspire lentamente o meio - recuperando a maior parte do fluido injetado para melhor rendimento celular.

Transfira a suspensão celular para um tubo coletor. Centrifugue para precipita