Marcação de linfócitos T auxiliares murinos usando anticorpos monoclonais radiomarcados

Para radiomarcar o ajudante T murino, os linfócitos Th portadores de um receptor de células T, TCR, específico para peptídeo de ovalbumina de galinha, usam um tubo contendo anticorpos monoclonais radiomarcados, mAbs, com a atividade radioativa desejada.

O mAb compreende um mAb murino específico para o TCR expresso na membrana do linfócito Th murino. Um quelante conjuga o mAb e um isótopo de cobre emissor de pósitrons, formando um complexo estável.

Dilua os mAbs radiomarcados com solução salina. Em seguida, adicione os mAbs radiomarcados diluídos a uma placa de vários poços contendo uma suspensão de linfócitos Th. Incube brevemente.

Dentro da cultura, os mAbs radiomarcados se ligam aos TCRs nas membranas dos linfócitos Th. Após a incubação, transfira a suspensão celular para um novo tubo.

centrifuga. Rejeitar o sobrenadante que contém anticorpos radiomarcados não ligados. Ressuspenda os linfócitos Th em meio e transfira para uma placa de vários poços. Incubar por um período prolongado.

A ligação mAb-TCR radiomarcada causa o recrutamento de proteínas adaptadoras para o lado citoplasmático da membrana plasmática, ao qual os triskelions de clatrina se ligam e formam uma fosseta revesti