Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:20 min. • July 8th, 2025
Para induzir colite - uma doença inflamatória intestinal - em um modelo murino, pegue um camundongo alojado em uma gaiola.
Substitua a água potável por uma solução de sulfato de dextrano sódico, DSS, um polissacarídeo indutor de colite. Permita que o mouse consuma a solução para desenvolver colite.
Após o consumo, o DSS entra no lúmen do cólon do camundongo. O cólon contém uma espessa camada de muco, fornecendo uma barreira física entre os micróbios comensais e a monocamada de células epiteliais subjacentes.
O DSS penetra na camada de muco, entrando nas células epiteliais. Dentro das células, o DSS altera a expressão de proteínas de junção apertada e induz a apoptose, resultando na ruptura da camada epitelial e da barreira mucosa. Isso permite a entrada de micróbios luminais na lâmina própria - o tecido subjacente com células dendríticas e macrófagos residentes.
As células imunes reconhecem os micróbios, ativando a sinalização a jusante para secretar citocinas pró-inflamatórias. As citocinas causam a infiltração de um grande número de células T que montam uma resposta imune exagerada, resultando em inflamação.
Monitore o camundongo tratado quanto a distúrbios gastrointestinais e perda de peso, indicando o início da colite.
Eutanásia do camundongo; isole cirurgicamente todo o cólon. Divida o cólon em seções proximal, média e distal e adicione um fixador para preservação do tecido.
O tecido está pronto para ensaios a jusante para avaliar a colite.
Para induzir o sulfato de dextrano sódico, ou colite DSS, substitua a água potável regular por solução de DSS a 3% ad libitum por sete dias, medindo o peso corporal de cada camundongo, o consumo da solução de DSS e a produção diária de fezes. Ao final do tratamento de sete dias, coloque o camundongo em decúbito dorsal e use uma tesoura pequena para fazer uma incisão na linha média de três centímetros de comprimento no abdômen.
Em seguida, use uma pinça para levantar o cólon para permitir que ele seja separado do mesentério circundante e extraia todo o cólon até que o ceco e o reto estejam visíveis. Passe o tecido na margem colonocecal e profundamente dentro da pelve, para liberar o cólon proximal e distal, respectivamente.
Meça e registre o comprimento do cólon isolado e use uma seringa de 10 mililitros equipada com uma agulha de gavagem para lavar o cólon com 10 mililitros de PBS gelado para remover as fezes e o sangue até que o eluato escorra limpo. Para identificação histológica, divida as amostras de tecido em seções proximais, médias e distais de tamanhos iguais e fixe os tecidos em paraformaldeído a 4% durante a noite a quatro graus Celsius.