Um sistema de cultura de órgãos intestinais ex vivo para estudar as interações hospedeiro-microbiota

Para estudar as interações entre o hospedeiro e a microbiota intestinal ex vivo, comece com um tecido do cólon murino livre de bactérias específicas colonizadoras do intestino. Lave o tecido com um meio para remover as fezes e transfira para uma placa de vários poços contendo um meio adequado.

Ao mesmo tempo, monte o dispositivo de cultura de órgãos intestinais ex vivo de vários poços.

Cada poço do dispositivo compreende duas portas de entrada e saída emparelhadas - a primeira conectando-se ao lúmen do cólon e a segunda fornecendo um suprimento contínuo de meio para os poços para manter a viabilidade do tecido.

Transfira o tecido para o dispositivo. Conecte as extremidades proximal e distal do cólon ao primeiro par de portas de entrada e saída. Inicie o fluxo do estimulante luminal no lúmen do cólon e o fluxo médio no poço.

O estimulante contém bactérias colonizadoras do intestino que secretam enzimas degradadoras da camada de muco, permitindo que elas se liguem às células epiteliais subjacentes. Isso ativa uma cascata de sinalização que aciona as células dendríticas residentes para estender seus dendritos entre as células epiteliais, capturando antígenos bacterianos e gerando resp