Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:47 min. • July 8th, 2025
As bactérias marcadas com opsoninas são reconhecidas por receptores específicos de neutrófilos, desencadeando fagocitose com liberação de espécies reativas de oxigênio, ou ROS, e degradação bacteriana.
Para quantificar a produção de ROS por neutrófilos in vitro, pegue uma placa de vários poços. O poço de teste contém um biofilme de Staphylococcus aureus compreendendo bactérias embebidas em filme de matriz extracelular. O poço de controle está sem o biofilme.
Incube o biofilme com soro humano, permitindo que as opsoninas séricas opsonizem o biofilme.
Aspire o soro. Lave com tampão, removendo opsoninas não ligadas. Adicione neutrófilos e luminol - um composto quimioluminescente aos poços. Centrifugue, aproximando os neutrófilos do biofilme.
Usando um leitor de placas, meça a luminescência ao longo do tempo.
No poço contendo biofilme, os neutrófilos se ligam às opsoninas do biofilme, causando ativação de neutrófilos e internalização bacteriana em fagossomos. Vias de sinalização específicas são ativadas, causando a montagem da NADPH oxidase nos fagossomos.
A NADPH oxidase catalisa a transferência de elétrons do NADPH para o oxigênio molecular, gerando ROS que degradam as bactérias. Alé
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