Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:21 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de vários poços contendo uma cultura de macrófagos. Infectar com Listeria monocytogenes que expressam proteínas fluorescentes, Lm.
As proteínas em Lm se ligam a receptores específicos de macrófagos, internalizando as bactérias dentro de um fagossomo. Além disso, Lm secreta toxinas formadoras de poros que rompem a membrana do fagossomo, liberando bactérias no citosol, onde se replicam e ficam cercadas por filamentos de actina hospedeiros.
As proteínas ActA indutoras de actina em Lm induzem a polimerização contínua da actina na extremidade traseira da bactéria. A cauda do cometa de actina gerada impulsiona Lm através do citosol e penetra na membrana celular dos macrófagos, liberando Lm polimerizado envolto em actina no meio.
Após a incubação, coletar e fixar o meio extracelular, ligado à actina e contendo Lm de um conjunto de poços. Fixe o Lm usando paraformaldeído. Adicione água destilada, rompendo os macrófagos e liberando o Lm intracelular. Coletar o Lm intracelular e fixar a amostra com paraformaldeído.
Em outros poços, substitua o meio por meio contendo gentamicina impermeável às células para eliminar o Lm extracelular. Substitua por meio novo e incube pelo perío
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